Масс-спектрометрия с меткой ¹⁸O для оценки активности трипсина

Авторы исследования оценили количественную масс-спектрометрию с меткой ¹⁸O для определения активности протеаз на примере трипсина и казеина. Метод использует изотопно-меченый пептид сравнения для измерения продукта гидролиза и, по выводам авторов, позволяет одновременно подтвердить подлинность и специфичность фермента. Для трипсина рассчитана константа Михаэлиса 13,65±0,60 мкМ, минимальная установленная чувствительность составила 0,50±0,08 мкМ. Ошибка повторных измерений была меньше, чем при спектрофотометрическом анализе. При гидролизе казеина выявлены фрагменты его белковых цепей, а покрытие аминокислотной последовательности трипсина составило 38%. Авторы считают, что подход можно адаптировать для других протеаз, однако для анализа необходимы масс-спектрометр и хроматограф, а также предварительный подбор пептида.